Technogene HyperTherm SynFusion Reverse Transcriptase

Technogene HyperTherm SynFusion Reverse Transcriptase

ویژگی های خلاصه محصول

توضیحات خلاصه محصول

10000Units/50Reactions

2,260,000 تومان

توضیحات

آنزیم RT ( ریورس ترنسکریپتاز معکوس – Reverse Transcriptase)

معرفی محصول:

آنزیم HyperTherm SynFusion Reverse Transcriptase نسل جدیدی از آنزیم های رونوشت بردار معکوس (RT) است که توسط تیم تحقیق و توسعه شرکت راتین ژن مهندسی و تولید شده که با پایداری حرارتی بالا( تا 65 درجه) و غیرفعال کردن فعالیت RNase H امکان سنتز دقیق، کامل با بازده بالا از انواع RNA را فرام میکند

مشخصات کلیدی:

پایداری دمایی فوق العاده:

با افزودن دو قطعه پروتئینی 23 و 28 اسید آمینه ای به دو سر N terminal و C terminal و Piont Mutation، پایداری حرارتی و عملکرد بهینه آنزیم در بازه دمایی 45-65 درجه سانتی گراد شده که موجب باز شدن ساختار های ثانویه پیچیده در RNA و افزایش کارایی Priming می شود

غیر فعال شدن RNase H:

با ایجاد جهش های نقطه ای در جایگاه فعال این دومن از آنزیم، فعالیت نوکلئازی آن کاهش یافته در نتیجه سنتز cDNA به صورت کامل و یکپارچه تا 13Kb انجام می‌شود

فرایند پذیری و دقت بالا:

عملکر موثر حتی با مقادیر بسیار کم RNA (تا 1 پیکوگرم) با سنتز cDNA با طول کامل و صحت بالا

مقایسه فعالیت :

Enzyme	Temperature (°C)	Ct
Invitrogen SuperScript IV Reverse Transcriptase	45	24.37
	48	24.21
	50	24.53
	53	24.73
	55	24.44
	60	25.12
	63	25.53
	65	26.18
HyperTherm SynFusion Reverse Transcriptase	45	24.17
	48	24.53
	50	24.37
	53	24.84
	55	24.01
	60	24.76
	63	25.64
	65	26.23

آنزیم RT چیست؟

آنزیم ریورس ترنسکریپتاز (Reverse Transcriptase یا RT) آنزیمی کلیدی در بیولوژی مولکولی است که در تبدیل رشته RNA به DNA مکمل و یا DNA حلقوی نقش دارد. این واکنش، در تبدیل ژنوم RNA Virus به DNA جهت گنجاندن در ژنوم میزبان نقش ایفا می‌کند.

انواع آنزیم RT و شکل‌های مهندسی شده

آنزیم‌های RT به صورت طبیعی در ویروس‌هایی مثل HIV، Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV) و Avian Myeloblastosis Virus (AMV) بیان میشود، که جهت تبدیل RNA ژنومی ویروس به DNA برای ورود به ژنوم میزبان، نقش دارد، با توجه به این فعالیت، در تکنیک های آزمایشگاهی در تشخیص و تحقیقات متعددی، انواعی از آنزیم های مهندسی ژنتیک شده استفاه می‌شود:

•RT با RNase H غیر فعال (RNase H-minus): این نسخه‌ها بخش RNase H را با ایجاد جهش در جایگاه فعال آنزیم و نقاط کلیدی آن، غیر فعال کرده‌ تا از تجزیه RNA در حین فرایند سنتز جلوگیری کرده و موجب افزایش کارایی سنتز به صورت کامل و یکپارچه می‌شود.

•RT با پایداری حرارتی بالا (Thermo-Resistant): جهش‌ و موتاسیون هایی در آنزیم، موجب افزایش پایداری آنزیم به حرارت شده که امکان فعالیت آنزیم در دمای بالاتر (45-65 درجه ) را فراهم کرده که با افزایش دمای سنتز، RNA با ساختار پیچیده ثانویه باز میشود.

⸻

بخش های آنزیم RT:

آنزیم RT معمولاً دو دومین اصلی دارد:

1.دومین پلیمراز: افزودن دئوکسی نوکلئیک اسید ها با الگوی RNA و ساخت DNA

2.دومین RNase H: در حین سنتز، رشته rna الگو را در کمپلکس RNA-DNA حذف میکند

⸻

اهمیت غیرفعال کردن RNase H و جهش‌های مربوط

غیرفعال کردن بخش RNase H (RNase H-minus) موجب سنتز cDNA بلندتر، با کیفیت‌ و با سرعت و دقت بالاتری انجام می‌شود که برای بسیاری از تکنیک‌ها مثل RT-PCR و توالی‌یابی نقش مهمی دارد.

⸻

جهش‌های افزایش‌دهنده پایداری حرارتی

جهش‌هایی که باعث افزایش پایداری دمایی RT می‌شوند معمولاً بر روی ساختار پروتئین و بخش‌های حساس به دما اعمال می‌شوند. برای مثال، تغییر در آمینواسیدهای کلیدی باعث استحکام ساختار سه‌بعدی و مقاومت در برابر دناتوراسیون می‌شود. افزایش پایداری دمایی به آنزیم اجازه می‌دهد در دماهای بالاتر ( 50-65 درجه سانتی‌گراد) فعالیت کند، که باعث:

•باز شدن ساختارهای ثانویه پیچیده RNA

•افزایش دقت و کارایی سنتز cDNA

•کاهش تشکیل محصولات جانبی و افزایش بازدهی واکنش می‌شود.

⸻

مزایای پایداری حرارتی بالا

در دمای 50-60 درجه سانتی گراد تفریبا تمامی رشته های RNA،به صورت خطی در آمده و دسترسی پرایمر های oligo dT, Random Hexamer و gene specific و همچنین آنزیم RT به رشته RNA تسهیل می‌شود.

مزیت آنزیمTechnogene HyperTherm SynFusion Reverse Transcriptase

این آنزیم با اضافه کردن دو توالی به دو سر آنزیم و ایجاد point mutation در نواحی کلیدی، پایداری دمایی آنزیم را بالا برده درنتیجه بررسی بیان ژنهایی که به علت ساختار ثانویه rna در دسترس آنزیم قرار نمیگیرند و موجب عدم شرکت آنها در واکنش شده و درنتیجه موجب افزایش Ct در RT-qPCR می شود را امکان پذیر میسازد( در بسیاری از تست های بررسی بیان ژن، بالا بودن Ct به همین علت میباشد نه پایین بودن بیان ژن مربوطه در سلول هدف!!!)

با پایین آوردن فعالیت و یا غیر فعال کردن بخش RNase H رشته RNA بلند به صورت یکپارچه و کامل به cDNA تبدیل می شود در نتیجه درصورتی که پرایمر های PCR در اگزون های اولیه(نزدیک به سر 5′) طراحی شده باشند و از آنجایی که سنتز از انتهای 3′ (دم poly A) شروع شده و به سر 5′ میرسد، در نتیجه اگزون های اولیه نیز به طور کامل به cDNA رونویسی شده و در نهایت در واکنش PCR شرکت خواهند کرد( در موارد زیادی، بالا بودن Ct در ریل تایم PCR بررسی بیان ژن، عدم امکان طراحی پرایمر در اگزون های نزدیک به سر 3′ بوده در نتیجه به اجبار باید پرایمر را در اگزون های اول طراحی کنیم، حال اگر آنزیم RT به صورت یکپارچه سنتز رو انجام نداده باشه، اگزون های اول به cDNA تبدیل نشده در نتیجه در واکنش PCR شرکت نخواهند کرد در نهایت به اشتباه بیان ژن پایین گزارش میشود!!!)

با این محصول، دقت کارتون بالاس.

قیمت آنزیم RT:

از آنجایی که این آنزیم توسط تیم تحقیق و توسعه داخل کشور تولید شده، ضمن دارا بودن کیفیت و کارایی بالا( همتراز با محصولات معتبر خارجی) قیمتی بسیار مقرون به صرفه دارد